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實(shí)驗結果不穩定?教你如何挑選優(yōu)質(zhì) ELISA 試劑盒

發(fā)布時(shí)間:2024-04-18     發(fā)布作者:通蔚生物

  酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是酶免疫測定技術(shù)中應用最廣的技術(shù)。用于檢測抗體或抗原的存在與濃度,用于檢測抗體或抗原的存在與濃度。如今,市面上供應各樣的ELISA試劑盒,種類(lèi)多樣,適用于越來(lái)越多的目標,每種試劑盒都聲稱(chēng)具有特異性、靈敏度和可靠性。在這里,上海通蔚生物將帶您了解選擇ELISA試劑盒考慮關(guān)鍵因素,確保您的選擇符合您的目標和要求。

通蔚elisa試劑盒

  確定自己ELISA試劑盒類(lèi)型


  ELISA試劑盒分為4種類(lèi)型,分別是直接elisa、間接elisa、夾心elisa和競爭elisa。


  1、直接ELISA、與報告酶(例如HRPAP)綴合一抗特異性結合微孔板孔中包被的抗原。


  2、間接ELISA遵循類(lèi)似的原理,但使用未標記的一抗與偶聯(lián)的二抗配對。


  3、夾心ELISA用一抗包被孔,一抗又結合樣品抗原。將添加一組新的抗體,在抗原上形成三明治(夾心)。


  4、在競爭性ELISA中,未標記的一抗首先與樣品抗原復合。將它們添加到涂有抗原的孔中。洗滌后,只有游離的、未結合的抗體才會(huì )與包被的抗原結合。添加偶聯(lián)的二抗和底物后,會(huì )產(chǎn)生與樣品中抗原量成反比的信號;樣品中抗原的量越大,信號越弱。該ELISA的另一種變體使用一抗來(lái)包被孔。然后標記的抗原將與樣品抗原競爭結合。所得的檢測信號仍然成反比。


  具體選擇哪種類(lèi)型取決于自己的實(shí)驗目標和抗原的潛在豐度,例如復雜樣品中的分析物豐度較低,那么夾心ELISA可能是最佳選擇。這將允許多次洗滌以降低背景噪音,并且仍然允許放大二抗的信號以確保整體靈敏度。如果您對檢測特定的免疫球蛋白感興趣,那么間接ELISA是合適的選擇。如果測定速度和簡(jiǎn)單性是最重要的因素,那么直接ELISA可能是您的最佳選擇。確定檢測的總體目標將幫助您確定哪種ELISA類(lèi)型最適合您的需求。詳情可以參考《elisa試劑盒有哪幾種類(lèi)型?elisa四類(lèi)型圖解


  如何選擇正確的ELISA試劑盒


  靶抗原特異性


  靶抗原特異性直接關(guān)系到實(shí)驗結果的準確性和可靠性??紤]您的實(shí)驗的性質(zhì)和目標的蛋白質(zhì)。該試劑盒是否識別全長(cháng)蛋白質(zhì)或特定表位?評估套件與您的目標的兼容性可確保結果的準確性和相關(guān)性。交叉反應性也可能是針對肽產(chǎn)生的抗體的一個(gè)問(wèn)題,因此確保適當的控制到位很重要。


  為了確保選擇具有高靶抗原特異性的ELISA試劑盒,你可以考慮以下幾個(gè)方面:


  1、查閱文獻:了解其他研究者在類(lèi)似實(shí)驗中使用的試劑盒,并查看他們對試劑盒特異性的評價(jià)。


  2、聯(lián)系試劑盒供應商:向供應商咨詢(xún)試劑盒的抗體特異性,并索取相關(guān)數據,例如抗體與靶抗原不同亞型的結合能力。


  3、進(jìn)行預實(shí)驗:使用少量樣品測試不同的試劑盒,比較它們的背景信號和特異性。


ELISA靈敏度和動(dòng)態(tài)范圍


  ELISA試劑盒的靈敏度是一個(gè)關(guān)鍵參數,它們決定了試劑盒的檢測能力,并影響實(shí)驗結果的準確性和可靠性。,尤其是在處理低豐度蛋白質(zhì)時(shí)。評估試劑盒的檢測下限(LOD)和動(dòng)態(tài)范圍,因為這些因素決定了試劑盒在一定濃度范圍內準確定量蛋白質(zhì)的能力。具有寬動(dòng)態(tài)范圍的高靈敏度套件通常更適合多功能應用。


  ELISA靈敏度的主要影響因素之一是所檢測底物的選擇。一般來(lái)說(shuō),化學(xué)發(fā)光底物的靈敏度是比色底物的10-20倍。如果需要更高的靈敏度,您甚至可以考慮使用電化學(xué)發(fā)光檢測、免疫PCR甚至單分子檢測的平臺,盡管所有這些解決方案雖然非常靈敏,但需要購買(mǎi)專(zhuān)門(mén)的設備和試劑。


  測定持續時(shí)間和工作流程復雜性


  考慮ELISA試劑盒的實(shí)際問(wèn)題,例如總體檢測持續時(shí)間和工作流程的復雜性。有些實(shí)驗可能需要快速周轉,而另一些實(shí)驗可能需要更長(cháng)的潛伏期。評估實(shí)驗方案的步驟,包括樣品制備、孵育時(shí)間和檢測方法,以確保與實(shí)驗室的日程安排和資源兼容。


  ELISA樣品


  不同的ELISA試劑盒針對特定樣品類(lèi)型進(jìn)行了優(yōu)化,從血清和血漿到細胞裂解物和組織勻漿。驗證所選套件是否適合您要分析的樣品類(lèi)型。某些試劑盒可能需要另外外的樣品制備步驟,忽視這一方面可能會(huì )導致結果受損。


  ELISA樣品制備有一些一般規則;最大限度地減少凍融循環(huán),在樣品緩沖液中添加蛋白酶抑制劑,確保評估潛在的基質(zhì)效應并確保優(yōu)化樣品稀釋。


  ELISA中的交叉反應和干擾


  檢查與相關(guān)蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應的可能性或樣品中常見(jiàn)物質(zhì)的干擾。評估試劑盒的特異性及其區分密切相關(guān)分子的能力對于獲得準確可靠的數據至關(guān)重要。


  請務(wù)必牢記,廠(chǎng)家可能不會(huì )針對所有樣品測試其ELISA試劑盒,因此始終存在交叉反應和/或干擾的可能性。運行適當的陽(yáng)性和陰性對照對于確保結果有效至關(guān)重要。


  ELISA廠(chǎng)家可靠性


  可靠的ELISA試劑盒經(jīng)過(guò)嚴格的驗證過(guò)程,以確保一致的性能。尋找經(jīng)過(guò)特異性、敏感性和重現性驗證的試劑盒。質(zhì)量控制措施,例如批次間的一致性,表明廠(chǎng)家致力于提供可靠的結果。


  ELISA數據分析


  評估ELISA試劑盒廠(chǎng)家提供的數據分析工具和報告功能。用戶(hù)友好的軟件具有強大的數據分析功能,可簡(jiǎn)化結果解釋并提高實(shí)驗的整體效率。


  如果您正在執行定量ELISA,即使您沒(méi)有執行,也請務(wù)必注意您的標準曲線(xiàn)。確定是否需要僅使用線(xiàn)性回歸模型來(lái)繪制數據,或者是否應該使用參數邏輯(4PL)模型。


  售后支持


  信譽(yù)良好的廠(chǎng)家提供全面的文檔,包括詳細的協(xié)議和故障排除指南。此外,在實(shí)驗過(guò)程中遇到挑戰時(shí),可靠的客戶(hù)支持非常寶貴。優(yōu)先考慮在客戶(hù)服務(wù)方面享有良好聲譽(yù)的廠(chǎng)家。


  最后,大家在選購ELISA試劑盒,要考慮合適的試劑盒是非常重要的,它決定你實(shí)驗的結果。通過(guò)上述為大家介紹選擇試劑盒考慮的因素,大家可以參考!在選擇ELISA試劑盒時(shí)候心中有數。上海通蔚生物擁有15年以上的ELISA試劑盒生產(chǎn)經(jīng)驗,搭建了ELISA試劑盒開(kāi)發(fā)和成熟抗原-抗體系統的良好平臺。如果需要考慮訂購ELISA試劑盒,歡迎前來(lái)咨詢(xún)。